中华人民共和国农业部公告 第1924号

根据《兽药管理条例》规定，我部组织制定了《氟苯尼考粉和氟苯尼考预混剂中非法添加氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的检查方法》（见附件），现予公布，自发布之日起执行。

                 中华人民共和国农业部

                   2013年4月12日

附件：

氟苯尼考粉和氟苯尼考预混剂中非法添加

氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、

恩诺沙星的检查方法

一、适用范围

本方法适用于氟苯尼考粉、氟苯尼考预混剂中非法添加氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的检查。

二、检查方法

照高效液相色谱法测定（《中国兽药典》二0一0版一部附录36页）。

色谱条件与系统适用性  用十八烷基键合硅胶为填充剂（Waters XBridge C18色谱柱或性能相当的色谱柱）；以磷酸溶液（取磷酸3.0ml，加水至1000ml，用三乙胺调pH至3.0±0.1，加乙腈50ml）–甲醇（88:12）为流动相，流速为每分钟1ml，采用二极管阵列检测器检测，采集波长为200nm～400nm，分辨率为1.2nm；记录283nm波长处的色谱图。

称取氧氟沙星对照品、诺氟沙星对照品、环丙沙星对照品、恩诺沙星对照品各约25mg分别置50ml量瓶中，加2%磷酸溶液–乙腈（1:1）适量，超声处理30分钟使溶解，放冷至室温，用2%磷酸溶液–乙腈（1:1）稀释至刻度，摇匀。各量取5ml置同一50ml量瓶中，用磷酸溶液（取磷酸3.0ml，加水至1000ml，用三乙胺调pH至3.0±0.1，加乙腈50ml）稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液。取10µl注入高效液相色谱仪，记录色谱图和光谱图。氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星各相邻色谱峰之间的分离度均应符合要求。

测定法  取供试品1.0g置具塞锥形瓶中，加2%磷酸溶液–乙腈（1:1）50ml，超声处理15分钟，放冷至室温，滤过，取续滤液5ml，加磷酸溶液（取磷酸3.0ml，加水至1000ml，用三乙胺调pH值至3.0±0.1，加乙腈50ml）稀释至50ml，摇匀，作为供试品溶液。另取需要验证物质的相应对照品（氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星）各约25mg，分别加2%磷酸溶液–乙腈（1:1）50ml，超声处理15分钟使溶解，放冷至室温；各取5ml，分别加磷酸溶液（取磷酸3.0ml，加水至1000ml，用三乙胺调pH值至3.0±0.1，加乙腈50ml）稀释至50ml，摇匀，作为对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各10µ1，分别注入高效液相色谱仪，同时记录色谱图和光谱图。通过与对照品液相色谱图保留时间、光谱图的比对，确定供试品中是否含有氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星。

三、结果判定

1．在相同实验条件下，供试品色谱图中如出现色谱峰与相应对照品峰保留时间一致（±5%），在大于200nm的波长范围内，供试品出现的色谱峰和相应对照品峰相对峰高大于10%时，两者光谱图无明显差异（必要时可调整供试品溶液的浓度），最大吸收波长一致（±2nm），判定为检出氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星。

2．供试品溶液色谱图中如出现与相应对照品保留时间一致的色谱峰，但峰面积小于检测限峰面积，判定为未检出氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星。

四、检  测  限

本测定法的检测限为0.5mg/g。

附图1，附图2：