中华人民共和国农业农村部公告第232号

根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定，经审查，批准法国维克有限公司生产的乙酸地洛瑞林植入剂在我国注册，核发《进口兽药注册证书》,并发布产品质量标准、说明书和标签，自发布之日起执行。

批准澳大利亚生物资源公司生产的鸡毒支原体活疫苗（TS-11）株在我国再注册，核发《进口兽药注册证书》,并发布修订后的产品质量标准、说明书和标签，自发布之日起执行。此前发布的该产品兽药质量标准、说明书和标签同时废止。

批准美国礼蓝动物保健有限公司英国生产厂生产的阿维拉霉素预混剂在我国再注册，核发《进口兽药注册证书》,并发布修订后的产品质量标准、说明书和标签以及最高残留限量(试行)和残留检测方法标准（试行），自发布之日起执行。此前发布的该产品兽药质量标准、说明书和标签同时废止。

批准英特威国际有限公司德国厂等3家公司生产的盐酸土霉素注射液等共11种兽药产品在我国变更注册。

特此公告。

附件：1.进口兽药注册目录

2.质量标准

3.说明书和标签

4. 阿维拉霉素最高残留限量（试行）和残留检测方法标准（试行）

农业农村部

2019年11月18日

附件1

进口兽药注册目录

善药名称	生产厂名称	国别	进口兽药注册证书号	有效期限	备注
乙酸地洛瑞林植入剂 Deslorelin Acetate Implant	法国维克有限公司 VIRBAC	法国	(2019)外兽药证字82号	2019.11.18 - 2024.11.17	注册
鸡毒支原体活疫苗（TS-11株） Mycoplasma gallisepticum Vaccine Live （Strain TS-11）	澳大利亚生物资源公司 Bioproperties Pty. Ltd.	澳大利亚	(2019)外兽药证字83号	2019.11.18 - 2024.11.17	再注册
阿维拉霉素预混剂 （10%） Avilamycin Premix （10%）	美国礼蓝动物保健有限公司英国生产厂 Elanco UK AH Limited	英国	(2019)外兽药证字84号	2019.11.18 - 2024.11.17	再注册
阿维拉霉素预混剂 （20%） Avilamycin Premix (20%)		英国	(2019)外兽药证字85号
盐酸土霉素注射液 Oxytetracycline Hydrochloride Injection	英特威国际有限公司德国厂 Intervet International GmbH	德国	(2017)外兽药证字11号	2017.02.27 - 2022.02.26	变更注册:兽药有效期由36个月变更为24个月
鸡传染性法氏囊病病毒火鸡疱疹病毒载体活疫苗（vHVT-013-69株） Bursal Disease - Marek’s Disease Vaccine， Serotype 3， Live Marek，s Disease Vector	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 Gainesville Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc.	美国	(2019)外兽药证字62号	2019.08.21 - 2024.08.20	变更注册:1.企业名称由“梅里亚有限公司 Merial，Inc.” 变更为“德国勃林格殷格翰动物保健有限公司 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH生产厂名称由“梅里亚有限公司(美国) Merial,Inc. 地址1168AirportParkway,SW,Gain esville,GA 30501” 变更为“勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 (Gainesville生产厂)BoehringerIngelheim Animal Health USA Inc.  地址1168 Airport Parkway,SW, Gain esville,GA  30501,USA”。
鸡马立克氏病活疫苗（CVI988株） Marek's Disease Vaccine,Live (Strain CVI988)	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 Gainesville Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc.	美国	(2015)外兽药证字33号	2016.10.10 - 2020.05
鸡马立克氏病I型、III型二价活疫苗 Marek's Disease (Serotype I,III BivalentVaccine,Live	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 Gainesville Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc.	美国	(2017)外兽药证字06号	2017.02.13 - 2022.02.12
鸡传染性法氏囊病复合冻干活疫苗(2512株) Infectious Bursal Disease Vaccine,Live Freeze-dried Complex (Strain 2512)	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 ( Gainesville生产厂) Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc	美国	(2018)外兽药证字35号	2018.08.30- 2023.08.29	变更注册:1.企业名称由“梅里亚有限公司 Merial，Inc.” 变更为“德国勃林格殷格翰动物保健有限公司 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH 2.生产厂名称由“梅里亚有限公司美国精选大药厂 Merial,Select Inc. 地址: Gainesville, GA 30503USA” 变更为“勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 (Gainesville生产厂) Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. 地址1168 Airport Parkway,SW,Gain esville,GA 30501,USA”。
猪支原体肺炎灭活疫苗(J株) Swine Mycoplasma Hyopneumoniae Vaccine Inactivated (Strain J)	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 ( St.Joseph生产厂) (Bobehringer Ingelheim Animal Health USA Inc.	美国	(2017)外兽药证字41号	2017.06.22- 2022.06.21	变更注册:生产厂名称由”勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. 地址:St. Joseph, Missouri 64506 U.S.A,US Vet.Lic.No.124” 变更为“勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司(St.Joseph生产厂) (Boehr inger Ingelheim Animal Health USA Inc. 地址:2621 North Belt Highway St.Joseph, MO 64506 USA”。
猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗 Porcine Circovirus Type 2 Baculovirus Vector Vaccine, Inactivated	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 ( St Joseph生产厂) Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc.	美国	(2018)外兽药证字42号	2018.10.18- 2023.10.17	变更注册:生产厂名称由”勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. 地址:2621 North Belt Highway St.Joseph, MO 64506 USA”。 变更为“勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司(St.Joseph生产厂) (Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc.) 地址:2621 North Belt Highway St.Joseph, MO 64506 USA”。
猪繁殖与呼吸综合征活疫苗 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Vaccine，Live	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 ( St Joseph生产厂) Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc.	美国	(2018)外兽药证字41号	2018.10.18- 2023.10.17
猪伪狂犬病活疫苗(K61株) Swine Pseudorabies Vaccine, Live(Strain K-61)	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 ( St Joseph生产厂) Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc.	美国	(2016)外兽药证字15号	2016.05.06- 2021.05.05
副猪嗜血杆菌病灭活疫苗(Z-1517株) Haemophilus Parasuis Vaccine， Inactivated（Strain Z-1517)	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 ( St Joseph生产厂) Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc	美国	(2015）外兽药证字46号	2015.09 - 2020.08	变更注册:生产厂名称由”勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. 地址:St.Joseph, MO 64506 U.S.A”。 变更为“勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司(St.Joseph生产厂) (Boehr inger Ingelheim Animal Health USA Inc. 地址:2621 North Belt Highway St.Joseph, MO64506 USA”。
猪回肠炎活疫苗 Lawsonia Intracellularis Vaccine Live	勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司 ( St Joseph生产厂) Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc	美国	(2015)外兽药证字58号	2015.12 - 2020.11

附件2略

附件3

乙酸地洛瑞林植入剂等3种兽药产品说明书和标签

一、乙酸地洛瑞林植入剂说明书和标签

(一)乙酸地洛瑞林植入剂说明书

宠物用

【兽药名称】

通用名称:乙酸地洛瑞林植入剂

商品名称:速抑情( Suprelorin®4.7mg）

英文名称: Deslorelin Acetate Implant

汉语拼音: Yisuan Diluoruilin Zhiruji

【主要成分】乙酸地洛瑞林

【性状】本品为白色至淡黄色圆柱形固体。

【药理作用】药效学 地洛瑞林为促性腺激素释放激素(GnRH)类似物，通过持续低剂量释放可抑制垂体-性腺轴，从而影响动物合成和/或释放促卵泡素(FSH)和促黄体生成素(LH)，进而影响雄性动物的生殖能力。给药后，血浆睾酮水平可能会立即出现短暂升高。给药后4～6周，持续低剂量释放的地洛瑞林开始引起雄性生殖器官功能的退化，表现为性欲减退、精子生成减少以及血浆睾酮水平降低。对血浆睾酮浓度的检测表明，药物作用可维持6个月。

药动学 犬给予5mg放射性同位素标记的地洛瑞林植入剂后，第7～35日其血浆中地洛瑞林浓度达峰值植入后约2.5个月，从血浆中仍可检测到地洛瑞林地洛瑞林代谢迅速。

【适应证】用于健康、性成熟、未阉割雄性犬的暂时节育。.

【用法与用量】背部肩胛间皮下植入:每只犬1支;不计体重，每6个月给药一次。

具体操作:1.消毒犬背部两肩胛间的施药部位。长毛犬可根据需要剪除植入部位毛发。

2.取下植入器上的鲁尔(Luer)锁帽，用鲁尔锁连接包装内的推进器与植入器。

3.提起肩胛间的松弛皮肤，将植入针全部扎入皮下。

4.完全压下推进器活塞，同时慢慢地将针拔出。

5.按压注射部位30秒。

6检査注射器与针头，确保药物已完全排出并能看到垫圈，在植入部位可触及植入物。

【不良反应】1.犬植入本品后，植入部位常见(发生率1％～10％)中等程度肿胀，约持续14日。

2.罕见(发生率0.01％～-0.10％6)的不良反应有:毛发异常(如脱毛、禿和毛发变形)、尿失禁、激素水平下降(如活动减少、睾丸缩小)等相关症状。

3.十分罕见(发生率＜0.01％)的不良反应有:睾丸上升至腹股沟:植入后出现短暂的性欲增强、睾丸增大和睾丸疼痛等症状，以上症状无需治疗，可自行消失;短暂的行为改变，攻击性增强。

【注意事项】1.本品节育有效时间为初次植入后6周到至少6个月，因此植入本品6周内的雄性犬应与发情雄性犬分开。植入6个月后交配，可能会致雌犬受孕，但如果每6个月植入1次，再次植入后则无需将给药的雄犬与雌犬分开

2.临床试验显示，植入本品六个月内，少数犬(1/75)发生交配，但未发生妊娠。植入后6周至6个月，一旦发生雄犬与雄大交配，应采取适当措施以防止妊娠。

3.本品正确植入后，阴囊周长应缩小，血浆率酮水平应降低。军见疑似药物无效(表现为睾丸未变小和或与雄犬交配)(发生率0.01％～0.10％)。测定睾酮(即生殖能力标志物)水平以确认药物是否无效，如果疑似药物无效，则需检查植入物是否遗失。

4.首次植入后，如怀疑植入物遗失，自怀疑遗失之日起6周后，若测得阴囊周长或血浆翠水平未降低，则可确认植入物遗失;首次植入6个月后再次植入，如怀疑植入物遗失，可通过阴囊周长和或血浆睾酮水平会出现渐进性增大或升高进行判定。上述两种情况均需要重新植入。

5.使用本品的犬，在恢复正常睾酮水平后的生殖能力，尚未进行相关研究。

6.手术或药物去势可能会改善或加重雄性大的攻击性行为。因此，不合群且出现攻击同种属和/成异种属动物行为的犬，不推荐使用本品。

7.避免本品植入至皮下脂肪层，因血管少的部位不利于药物的释放。

8.植入物会自然吸收无需人工移除。如需终止给药，可通过超声确定植入物位置，由兽医通过外科手术将其移除。推进器可重复使用。

9.按10倍推荐剂量皮下植入后，组织学观察显示:施药后3个月可能出现轻微的局部结缔组织慢性炎症、结痂和胶原蛋白沉积;除“不良反应”部分所述的不良反应外，未观察到其他临床不良反应。

10.本品对青春期之前犬的作用尚无研究，所以仅推荐用于性成熟的犬。临床试验表明，植入本品12个月后，绝大多数小型犬(体重低于10kg)仍保持睾酮水平的抑制，特大型犬(超过40kg)的数据有限，但睾酮水平抑制的持续时间与中、大型犬相当，因此小型犬和特大型犬使用本品时需兽医对其进行风险/收益评估。试验数据表明，使用本品会降低犬的性欲.

11.使用本品时需确保固定好动物，避免意外自伤。在植入前方可取下植入器的针帽。

如果药物意外注入使用者身体，应立即携带说明书或标签就医，移除植入物。由于GnRH类似物可通过皮肤吸收，一旦本品直接接触皮肤，应立即清洗药物接触部位。避免孕妇操作给药，因GnRH类似物对实验动物有胚胎毒性，且缺乏孕妇操作乙酸地洛瑞林给药的相关研究。

12.置于儿童不可触及处。

13.本品禁止冷冻。

【休药期】不需要制定。

【规格】4.7mg

【包装】(1)2支/盒(2)5支/盒

【贮藏】2℃～8℃保存。

【有效期】36个月。

【进口兽药注册证号】

【生产企业】法国维克有限公司( VIRBAC)

地址: I ERE AVENUE 2065 M LID, 06510 CARROS, FRANCE

(二)乙酸地瑞林植入剂标签

宠物用

【兽药名称】

通用名称:乙酸地洛瑞林植入剂

商品名称:速抑情( Suprelorin®4.7mg）

英文名称: Deslorelin Acetate Implant

汉语拼音: Yisuan Diluoruilin Zhiruji

【主要成分】乙酸地洛瑞林。

【性状】本品为白色至淡黄色圆柱形固体。

【适应证】用于健康、性成熟、未阉割雄性犬的暂时节育

【用法与用量】背部肩胛间皮下植入:每只犬1支:不计体重，每6个月给药一次。(详见说明书)。

【规格】4.7mg

【进口兽药注册证号】

【生产日期】

【生产批号】

【有效期】至

【休药期】不需要制定。

【贮藏】2℃～8℃保存。

【包装】(1)2支/盒(2)5支/盒

【生产企业】法国维克有限公司( VIRBAC)

地址:1 ERE AVENUE 2065 MLID，06510 CARROS， FRANCE

二、鸡毒支原体活疫苗(TS-11株)说明书和内包装标签

(一)鸡毒支原体活疫苗(TS-11株)说明书

兽用

【兽药名称】

通用名 鸡毒支原体活疫苗(TS-11株)

商品名 无

英文名 Mycoplasma gallisepticum Vaccine， Live( Strain TS-11)

汉语拼音 Jiduzhiyuanti Huoyimiao(TS-11Zhu)

【性状】淡黄色澄明液体，静置后，底部有少量沉淀物。

【主要成分与含量】每羽份疫苗中含鸡毒支原体TS-11株至少107ccU。

【作用与用途】用于预防由鸡毒支原体引起的慢性呼吸道病。

【用法与用量】用于蛋鸡和种鸡点眼接种，每只0.03ml。推荐在6～14周龄时进行接种。使用时，取疫苗在温水(温度不超过37℃)中快速融化，轻轻摇动，使疫苗混合均匀。在疫苗瓶上装上滴头。将鸡头倾向一侧，将疫苗轻轻滴在眼内，等疫苗全部进入眼内后放开鸡。

【不良反应】一般无可见不良反应。

【注意事项】(1)仅用于接种健康鸡。

(2)融化后的疫苗，应放在阴凉处，并限3小时内一次用完，未用完的应废弃。

(3)疫苗融化后应避光、避热，防止接触消毒剂。

(4) 在接种前2周、接种后4周内，不得使用具有抗鸡毒支原体作用的药物。

(5) 用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

【规格】30ml(1000羽份)/瓶

【贮藏与有效期】-70℃以下保存，有效期为12个月;-18℃以下保存，有效期为4周。

【《进口兽药注册证书》证号】

【生产企业】澳大利亚生物资源公司( Bioproperties Pty.Ltd.)

地址: ACN 007 303 728, 36 Charter Street, Ringwood Victoria 3134, AUSTRALIA

电话:03-9876-0567

传真:03-9876-0556

仅在兽医指导下使用

(二)鸡毒支原体活疫苗(TS-11株)内包装标签

兽用

鸡毒支原体病活疫苗(TS-11株)

30ml(1000羽份)/瓶

《进口兽药注册证书》证号:

批号:

有效期至:

【作用与用途】用于预防由鸡毒支原体引起的慢性呼吸道疾病。

【贮藏与有效期】-70℃以下保存，有效期为12个月:-18℃以下保存，有效期为4周。

【生产企业】澳大利亚生物资源公司( Bioproperties Pty.Ltd.)

仅在兽医指导下使用

三、阿维拉霉素预混剂说明书和标签

（一）阿维拉霉素预混剂说明书

兽用

【兽药名称】

通用名称:阿维拉霉素预混剂

商品名称:效美素®:8(Surmax®）

英文名称: Avilamycin Premix

汉语拼音: Aweilameisu Yuhunji

【主要成分】阿维拉霉素

【性状】本品为棕色粉末

【药理作用】寡糖类抗生素。主要对革兰氏阳性菌有抗菌作用。本品能提高猪肠道对葡萄糖的吸收，增加挥发性脂肪酸产量并减少乳酸的产生。阿维拉霉素在临床上能有效的辅助控制由大肠杆菌引起的断奶仔猪腹泻的发生和恶化。同时能降低大肠杄菌表面黏附菌毛的产生。细菌缺少表面黏附菌毛则抑制它们在肠黏膜上的吸附，减轻肠道的损伤，从而控制腹污的发生。

本品经内服给药，几乎不被肠道吸收，因而在猪组织中残留极微。

【适应证】用于辅助控制由大肠杆菌引起的断奶仔猪腹泻。

【用法与用量】以阿维拉霉素计。混饲:每1000kg饲料，仔猪40～80g，连用28日。

【不良反应】按照推荐剂量使用，未见不良反应。

【注意事项】勿让儿童接触;搅拌配料时防止与人的皮肤、眼睛接触。

【休药期】猪0日。

【规格】以阿维拉霉素计(1)100:10g(2)100:20g

【包装】

【贮藏】在阴凉干燥处保存。

【有效期】24个月。

【进口兽药注册证号】

【生产企业】美国礼蓝动物保健有限公司英国生产厂( Elanco UK AH Limited)

地址: FLEMING ROAD， SPEKE LIVERPOOL，L24 9LN，UK

(二)阿维拉霉素预混剂标签

兽用

【兽药名称】

通用名称:阿维拉霉素预混剂

商品名称:效美素®:8(Surmax®）

英文名称: Avilamycin Premix

汉语拼音: Aweilameisu Yuhunji

【主要成分】阿维拉霉素

【性状】本品为棕色粉末

【适应证】用于辅助控制由大肠杆菌引起的断奶仔猪腹泻。

【用法与用量】以阿维拉霉素计。混饲:每1000g饲料，仔猪40～80g，连用28日。

【休药期】猪0日。

【规格】以阿维拉霉素计(1)100:10g(2)100:20g

【包装】

【生产日期】

【生产批号】

【有效期】至

【贮藏】在阴凉干燥处保存。

【进口兽药注册证号】

【生产企业】美国礼蓝动物保健有限公司英国生产厂( Elanco UK AH Limited)

地址: FLEMING ROAD， SPEKE LIVERPOOL，L24 9LN，UK

附件4

阿维拉霉素最高残留限量(试行)

和残留检测方法标准(试行)

阿维拉霉素最高残留限量(试行)

《动物性食品中兽药最高残留限量》(农业部公告第235号)无阿维拉霉素的每日允许摄入量(ADI)。申报单位参照国际食品法典委员会(CAC)和欧盟的有关标准，制定了阿维拉霉素的ADI和在鸡组织中的最高残留限量(MRLs)，具体数据见表1。

表1阿维拉霉素的ADI及在鸡组织中的MRLs信息表

活性成分	ADI	残留标示物	靶动物	靶组织	MRLS
阿维拉霉素	0~2000 μg/(kg.b w)/d	二氯异苔酸(Dichloroisoeverninic acid, DIA)	鸡	肌肉 皮+脂 肝 肾	200μg-1200μg-1300μg-1200μg-1

鸡组织中阿维拉霉素残留检测(试行)

液相色谱-串联质谱法

1范围

本标准规定了鸡组织中阿维拉霉素残留检测的制样和液相色谱串联质谱法测定方法。

本标准适用于鸡的肌肉、肝脏、肾脏及皮脂中二氯异苔酸(DIA)残留量的检测

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修定版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试料中残留的阿维拉霉素，用丙酮提取，氢氧化钠溶液水解，乙酸乙酯/甲基叔丁醚液液萃取，氧化铝固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法检测，内标法定量。

4试剂和材料

以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂;水为符合GB/T6682规定的一级水。

4.1阿维拉霉素残留标示物二氯异苔酸(DIA)对照品，纯度大于99％。

4.2阿维拉霉素残留标示物内标DIA-d₆对照品，纯度大于99％。

4.3超纯水:由Milli-Q超纯水仪制取。

4.4丙酮:色谱纯

4.5氢氧化钠。

4.6磷酸。

4.7乙酸乙酯:色谱纯。

4.8甲基叔丁醚:色谱纯。

4.9甲醇:色谱纯。

4.10正己烷:色谱纯。

4.11乙腈:色谱纯。

4.12甲酸:色谱纯。

4.13中性氧化铝固相萃取柱:1g/6mL。

4.14滤膜:0.2μm。

4.15阿维拉霉素标准備备液(Img/mL):准确称取含阿维拉霉素10mg的对照品，于10mL棕色容量瓶中，用丙酮溶解并稀释至刻度，配成浓度为1mg/mL的标准储备液。-20℃贮藏，有效期1个月。

4.16 DIA标准储备液(100μg/mL):准确称取含DIA1mg的对照品，于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配成浓度为100μg/mL的标准储备液。-20℃贮藏，有效期8个月。

4.17 DIA-d₆内标储备液(100μg/mL):准确称取含DIA-d₆1mg的对照品，于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配成浓度为100μg/mL的标准储备液。-20℃贮藏，有效期8个月。

4.18阿维拉霉素标准工作液(100μg/mL):准确量取0.5mL阿维拉霉素标准储备液于50mL棕色容量瓶中，用丙酮稀释至刻度。-20℃贮藏，有效期1个月。

4.19DIA标准工作液(100μg/mL):准确量取1 ML DIA标准储备液于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。-20℃贮藏，有效期8个月。

4.20DIA-d₆内标工作液(1μg/mL):准确量取0.1 ML DIA-d₆内标储备液于10mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。-20℃贮藏，有效期8个月

5仪器和设备

5.1超高效液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源

5.2分析天平:感量0.00001g

5.3天平:感量0.01g。

5.4组织匀浆机。

5.5高速冷冻离心机。

5.6涡旋混合器。

5.7氮吹仪。

5.8旋转蒸发仪。

5.9固相萃取装置。

6试样的制备与保存

6.1试料的制备。

取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质。

——取均质的供试样品，作为供试试料。

——取均质的空白样品，作为空白试料

——取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.2试料的保存

20℃以下保存。

7测定步骤

7.1提取

称取试料1(±0.02)g，置于50mL离心管中。加入4mL丙酮，摇15s，涡旋5min，6000转/min离心5min。取上清液于另一50mL离心管中。残渣加4mL丙酮，重复提取两次，合并提取液，10000转/min离心5min，取上清液60℃氮气吹干。用4mL 1mol/L NaOH溶液溶解残余物，涡旋30s，70℃水浴2h。用约1mL磷酸调pH值至1，加入4mL乙酸乙酯/甲基叔丁醚(1:1)，振摇15，涡旋15s，6000转/min离心5min，收集上清液。残渣加4mL乙酸乙酯/甲基叔丁基醚(1:1)重复萃取两次，合并萃取液，加入1μg/mL DIA-d₆内标工作液100μL混匀备用。

7.2净化

中性氧化铝柱用10mL乙酸乙酯活化，取备用液过柱，用5mL乙酸乙酯/甲基叔丁醚(1:1)清洗管壁后过柱，再分别用5mL正己烷、5mL乙酸乙酯、5mL甲醇洗涤，然后用7mL含5％甲酸的乙腈溶液洗脱三次。洗脱液于50℃旋转蒸发至干，用2mL甲醇复溶，涡旋lmin，50℃氮气吹干，用甲醇-水(1:1)1mL复溶，涡旋1min，14000转/min离心20min，滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

7.3基质匹配标准曲线的制备

取7份空白样品，经提取净化后，加入适量的DIA和DIA-d₆标准工作液制备基质匹配标准溶液，对应鸡肌肉样品中DLA的添加浓度为5、10、25、50、100、200、500μg/kg:对应鸡肝脏样品中DIA的添加浓度为5、10、50、150、300、600、1000μg/kg；对应鸡肾脏、鸡皮脂样品中DIA的添加浓度为5、10、50、100、200、400、1000μg/kg，供超高效液相色谱-串联质谱测定。以测得的DIA特征离子峰面积与DIA-d₆特征离子峰面积之比作为纵坐标，对应的浓度为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程和相关系数。

7.4测定

7.4.1色谱参考条件

色谱柱:C₁₈，50mm*2.1mm，1.7μm或效能相当者。

流动相:A相为0.1％甲酸溶液;B相为甲醇。

流速:0.4mL/min

柱温:40℃

进样量:5μL。

线性梯度洗脱:洗脱程序见表1。

表1线性梯度洗脱条件

时间(min)	流速( ml/min)	流动相A(％)	流动相B(％)	曲线
0 0.5 1.5 2.0 2.1 4.0	0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4	90 90 1 1 90 90	10 10 99 99 10 10	6 6 6 6 6 6

7.4.2质谱参考条件

离子源:电喷雾离子源。

扫描方式:负离子扫描。

检测方式:多反应监测。

电离电压:0.8kV

源温:150℃

雾化温度:500℃

锥孔气流速:150L/h

雾化气流速:1000L/h

测试药物定性、定量离子对及对应的锥孔电压、碰撞能量见表2

表2 DLA及其内标的定性、定量离子及锥孔电压、碰撞能量

化合物	定性离子对(m/z)	锥孔电压(V)	碰撞能量(eV)
DIA   DIA-d6	248.9>190.3a 248.9>205.3a 254.9>193.3a	24 24 16	20 14 20

(^a定量离子)

7.5测定法

7.5.1定性测定

通过样品色谱图的保留时间与基质匹配标准溶液的保留时间、各色谱峰的特征离子与基质匹配标准溶液色谱峰的特征离子相对照定性。样品与基质匹配标准溶液的保留时间的相对偏差不大于2.5％:样品特征离子的相对丰度与基质匹配标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。

表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度	>50%	＞20％至50％	＞10％至20％	≤10%
允许的相对偏差	士20％	土25％	士30％	士50％

7.5.2定量测定

取试样溶液和相应的基质匹配标准溶液，按内标法定量，标准溶液及试样溶液中DIA的响应值均应在仪器检测的线性范围内。

7.6空白试验

除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。

8结果计算和表述

鸡组织中阿维拉霉素残留标示物DIA的残留量按下式计算

 

 

单点校准:

或基质匹配标准曲线校准:

式中:

X----试料中DIA的残留量，μg/kg;

C----从标准曲线得到的DIA浓度，μg/L

A_i----试料溶液中DLA的峰面积;

A^，_is----基质匹配标准溶液中DIA-d6的峰面积

C_s----基质匹配标准溶液中DIA的浓度，μg/L

C_is----试料溶液中DIA-d6的浓度，μg/L

A_is----试料溶液中DIA-d6的峰面积;

A_s----基质匹配标准溶液中DIA的峰面积:

C^，_is----基质匹配标准溶液中DIA-d6的浓度，μg/L;

V----最终定容体积，mL;

m----称样量，g;

f----稀释倍数。

注:计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。

9检测方法灵敏度、准确度和精密度

9.1灵敏度

本方法在鸡组织(肌肉、肝脏、肾脏、皮脂)中阿维拉霉素残留标示物DIA的检测限均为5μg/kg，定量限均为10μg/kg。

9.2准确度

本方法对鸡肌肉组织中阿维拉霉素残留标示物DIA在10μg/kg～400μg/kg添加浓度(对应阿维拉素添加浓度为56μg/kg～2240μg/kg)的回收率为70%～110%;对鸡肝脏组织中阿维拉霉素残留标示物DIA在10μg/kg～600μg/kg(对应阿维拉荐素添加浓度为56μg/kg～3360μg/kg)的回收率为70％～110％;对鸡肾脏组织中阿维拉霉素残留标示物DIA在10μg/kg～400μg/kg添加浓度(对应阿维拉霉素添加浓度为56μg/kg～2240μg/kg)的回收率为70％～110％;对鸡皮脂组织中阿维拉霉素残留标示物DIA在10μg/kg-400μg/kg(对应阿维拉霉素添加浓度为56μg/kg～2240μg/kg)的回收率为70%～110%。

9.3精密度

本方法的批内相对标准偏差≤20％，批间相对标准偏差≤20％。

附录A

(资料性附录)

 

图A1.1空白鸡肝脏样品特征离子质量色谱图

 

图A1.2鸡肝脏基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图(300μg/kg)

 

图A1.3空白鸡肝脏添加试样特征离子质量色谱图(300μg/kg)