关于应用生猪尿液中瘦肉精速测方法的通知

各省、自治区、直辖市畜牧（农牧、农业）厅（委、局、办）、饲料工作（工业）办公室，各饲料质检机构：

    经专家审定和我部审查批准的《尿液中盐酸克仑特罗的测定  胶体金免疫层析法》（NY/T933-2005），已被列为农业行业标准。该方法进行尿液中瘦肉精筛选的时间仅为十几分钟，是目前尿液中筛选瘦肉精最快的方法之一。为尽快在饲料和畜产品安全检测中推广应用该速测方法，提高检测效率，降低监管成本，现通知如下：

    一、请国家饲料质量监督检测中心（北京）和各部级饲料质量监督检测中心组织开展《尿液中盐酸克仑特罗的测定  胶体金免疫层析法》速测方法的培训，力争在一个月内使重点地区基层组织畜牧和饲料管理部门的执法人员熟练掌握该检测方法。

    二、请各饲料质量监督检验测试单位在生猪尿液瘦肉精筛选检测中，抓紧进行速测方法与其他检测方法的比较，总结经验，进一步加大对生猪主产区、重点生猪外销区屠宰企业瘦肉精等违禁药品使用情况的监测力度，努力保障饲料和畜产品消费安全。

    三、请各有关部门将人员培训情况和瘦肉精等违禁药品监控结果，于2006年3月15日前报全国饲料工作办公室。

附件：尿液中盐酸克仑特罗的测定  胶体金免疫层析法（NY/T933-2005）

中华人民共和国农业部办公厅

二〇〇五年十二月二日

附件：

尿液中盐酸克仑特罗的测定胶体金免疫层析法

1  范围

    本标准规定了用胶体金免疫层析法检测尿液中的盐酸克仑特罗。

    本标准适用于猪、牛尿液中盐酸克仑特罗的快速检测。检测限为3ng/mL。

2  原理

    本试验为竞争抑制法。将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移。在移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。样本中的盐酸克仑特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克仑特罗—BSA偶联物的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性；反之，检测线显红色，结果为阴性。

3  试剂和材料

    3.1  胶体金免疫层析快速检测装置组成。

    3.1.1  盐酸克仑特罗全抗原的偶联率为1:10～1:20（BSA:CL）。

    3.1.2  抗盐酸克仑特罗抗体，多抗或单抗。多抗可以由兔或羊血清获得，效价应＞5000（间接ELISA法），或有效抗体含量应＞0.05mg/mL；特异性应＞5000（间接抑制ELISA法）。单抗由鼠腹水获得，效价应＞15000（间接ELISA法），或有效抗体含量应＞0.5mg/mL；特异性应＞5000（间接抑制ELISA法）。抗体相对亲和力为3.56×10⁹（结合率下降50%时，相对应的抗体浓度的倒数）。

    3.1.3  样品垫：玻璃纤维或纸质薄片。

    3.1.4  金释放垫：玻璃纤维片，免疫金释放时间＜5min，释放效率＞80%。

    3.1.5  NC膜：孔径为0.45μm，4cm毛细管时间≥140s。

    3.1.6  吸水纸。

    3.1.7  底板。

    3.1.8  塑料盒。

3.2  塑料吸管。

    3.3  阴性对照：盐酸克仑特罗阴性尿样。

    3.4  阳性对照：盐酸克仑特罗阳性尿样，含量为3ng/mL。

    3.5  待检尿样。

4  实验步骤

4.1  从包装袋中取出盐酸克仑特罗胶体金免疫层析快速检测装置，置于平整的台面上待测。检测装置取出后，应即开即用。

    4.2  用塑料吸管（4.2）垂直滴加3滴无气泡的待检尿样（约60μL）于加样孔内。每批需做阴性对照和阳性对照各一孔，加样方法同样本。如果尿液呈浑浊状态，建议做离心（5000r/min，5min）或过滤处理后，再使用测试装置。

    4.3  加样15min后立即判断结果。

5  结果判断

    5.1  阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说明检测装置有效。可进行检测。

    5.2  如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测装置失效，不能进行检测。

    5.3  待检尿样出现红色条带为阴性（不含盐酸克仑特罗或盐酸克仑特罗的含量＜3ng/mL）。

    5.4  待检尿样不出现红色条带为阳性（盐酸克仑特罗的含量≥3ng/mL）。

    6  结果的确认

    阳性样品应用质谱方法进行确认。