中华人民共和国农业部公告

第2320号

根据《兽药管理条例》规定，我部组织制定了鱼腥草注射液中非法添加林可霉素检查方法、鱼腥草注射液中非法添加水杨酸、氧氟沙星检查方法和中兽药散剂中非法添加金刚烷胺和金刚乙胺检查方法等3项检查方法标准，现予发布，自发布之日起执行。

特此公告。

 

附件：1．鱼腥草注射液中非法添加林可霉素检查方法

2．鱼腥草注射液中非法添加水杨酸、氧氟沙星检查方法

3．中兽药散剂中非法添加金刚烷胺和金刚乙胺检查方法

 

　　　　　　　　 农业部

　　　　　　　　  2015年11月13日

 

 

附件1

鱼腥草注射液中非法添加林可霉素检查方法

   

1  适用范围

  　1.1  本法适用于鱼腥草注射液（中国兽医药品监察所检验编号为WTH150003～WTH150005）的检查。

　  1.2  用于其他兽药制剂中非法添加林可霉素检查时，需进行空白试验和检测限测定。

2  检查方法

  　照高效液相色谱–串联质谱法测定（《中国兽药典》）二0一0年版一部附录36页、107页）

  　色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。以乙腈（A相）和10mM乙酸铵水溶液（B相）为流动相，梯度洗脱：0～6min，10%A线性变化至70%A；6–7.5min保持10%A。流速为0.3ml/min；柱温为30℃；进样量为10μl。

质谱条件  扫描方式为电喷雾正离子模式；检测方式为多反应监测；毛细管电压为3.2kV；萃取电压3.0V；RF透镜电压0.5V；源温为110℃；雾化温度为350℃；雾化气流速为650L/hr；锥孔气流速为50L/hr。

定性、定量离子对及参考锥孔电压和碰撞能量表 

 

测定法  准确量取供试品1.0ml，置塑料离心管中，加入甲醇1.0ml，充分涡旋混匀，从中取0.1ml，用50%甲醇溶液稀释至10.0ml，取适量溶液用0.22μm滤膜过滤，作为供试溶液上机测试。若其中药物含量较高，可再用50%甲醇溶液进行逐级稀释，作为供试溶液上机测试。

另精密称取林可霉素对照品10.0mg，用甲醇溶解定容至10ml，再用50%甲醇溶液稀释成浓度为1μg/ml的溶液，作为对照溶液。

  　取供试溶液和对照溶液供液相色谱–串联质谱仪测定，记录特征离子质量色谱图。

3  结果判定

  　3.1  试剂空白和样品空白不出现与对照溶液相同的特征离子峰；

  　3.2  特征离子色谱峰的信噪比（S/N）都在3:1以上，信噪比以峰对峰（PtP）计算；

  　3.3  供试溶液色谱峰的保留时间，应与对照溶液的保留时间一致（偏差小于等于±5%）；

3.4  供试溶液的特征离子丰度比应与对照溶液一致，容许偏差符合下表的要求。

特征离子丰度比的允许偏差范围表

 

供试溶液色谱图与对照溶液色谱图相比，满足上述定性条件，计算供试品中林可霉素的浓度，如大于等于1μg/ml，判为检出林可霉素。

  　1μg/ml林可霉素对照溶液特征离子质量色谱图见附录。

  　

附录：林可霉素对照溶液特征离子质量色谱图（略）

 

 

附件2

鱼腥草注射液中非法添加水杨酸、氧氟沙星检查方法

 

1  适用范围

  　1.1  本法适用于鱼腥草注射液（中国兽医药品监察所检验编号为WTH150003～WTH150005）的检查。

　  1.2  用于其他兽药制剂中非法添加水杨酸和氧氟沙星检查时，需进行空白试验和系统适用性试验，供试品溶液中水杨酸色谱峰、氧氟沙星色谱峰与相邻色谱峰分离度应符合要求。

2  检查方法

  　照高效液相色谱法（《中国兽药典》）二0一0年版一部附录36页）测定

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸二氢钠溶液（取磷酸二氢钠3.0g，加1000ml水使溶解，加三乙胺0.5ml，用氢氧化钠饱和溶液调节pH值至7.0）为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱；二极管阵列检测器，采集波长范围为210nm～400nm，分辨率为1.2nm；记录293nm波长处的色谱图。各色谱峰之间的分离度均应符合要求。

 

  　

测定法  取供试品1.0ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀；取1.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液；取水杨酸对照品和氧氟沙星对照品适量，分别加甲醇制成每1ml中各含0.1mg、0.05mg的溶液，作为对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，同时记录色谱图与光谱图。通过与对照品液相色谱图保留时间、光谱图的比对，确定供试品中是否含有水杨酸或氧氟沙星。

3  结果判定

3.1  在相同试验条件下，供试品溶液色谱图中如出现色谱峰与水杨酸对照品峰或氧氟沙星对照品峰保留时间一致（差异小于等于±5%），且为单一物质峰（纯度角度小于纯度阈值）；在大于210nm的波长范围内，两者紫外光谱图匹配（匹配角度小于匹配阈值），最大吸收波长一致（差异小于等于±2nm），判定为检出水杨酸或氧氟沙星。

　  3.2  进行其他兽药制剂中非法添加水杨酸或氧氟沙星检查时，可通过调整供试品溶液或对照品溶液的浓度，使两者峰面积近似后，进行检测。

4  检出限

　  本法中水杨酸和氧氟沙星的检出限均为2.5mg/ml。

 

 

附件3

中兽药散剂中非法添加金刚烷胺和金刚乙胺检查方法

  　

1  适用范围

  　1.1  本法适用于白头翁散、苍术香连散和银翘散的检查。

　  1.2  用于其他兽药制剂中非法添加金刚烷胺和金刚乙胺检查时，需进行空白试验和检测限测定。

2  检查方法

  　照高效液相色谱–串联质谱法（《中国兽药典》）二0一0年版一部附录36页、107页）测定

  　色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。以0.1%甲酸乙腈溶液（A相）和0.1%甲酸水溶液（B相）为流动相，梯度洗脱：0～1min，保持10%A；1～5 min，10%A线性变化至90%A；5～6.5min保持10%A。流速为0.3ml/min；柱温为30℃；进样量为10μl。

质谱条件  扫描方式为电喷雾正离子模式；检测方式为多反应监测；毛细管电压为3.0KV；源温为110℃；雾化温度为350℃；雾化气流速为650L/hr；锥孔气流速为50L/hr；数据采集窗口5min。

定性、定量离子对及参考锥孔电压和碰撞能量表

  　

测定法  取供试品1.0g，置具塞锥形瓶中，加入乙腈20.0ml，超声处理15分钟，静置，取适量上清液过滤，取滤液0.1ml，用20%乙腈溶液稀释至10.0ml。取该溶液适量用20%乙腈溶液稀释至每1ml含金刚烷胺和金刚乙胺约1ng，用0.22μm滤膜过滤，作为供试品溶液。

　  另取金刚烷胺和金刚乙胺对照品适量，加乙腈溶解，用20%乙腈溶液稀释成每1ml含金刚烷胺和金刚乙胺1ng，作为对照品溶液。

  　取供试品溶液和对照品溶液供液相色谱–串联质谱仪测定，记录特征离子质量色谱图。

3  结果判定

  　3.1  试剂空白和样品空白不出现与对照品溶液相同的特征离子峰；

  　3.2  特征离子色谱峰的信噪比（S/N）都在3:1以上，信噪比以峰对峰（PtP）计算；

　  3.3  供试品溶液色谱峰的保留时间，应与对照品溶液的保留时间一致（偏差小于等于±5%）；

3.4  供试品溶液的特征离子丰度比应与对照品溶液的一致，容许偏差符合下表的要求。

特征离子丰度比的允许偏差范围表

 

供试溶液色谱图与对照溶液色谱图相比，满足上述定性条件，计算供试品中金刚烷胺和金刚乙胺的浓度，如大于等于1mg/kg或1mg/L，判为检出金刚烷胺和金刚乙胺。