中华人民共和国农业农村部公告第215号

根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定，经审查，批准梅里亚有限公司法国生产厂等2家公司生产的猪伪狂犬病活疫苗（Bartha株）等3种兽药产品在我国再注册，核发《进口兽药注册证书》,并发布修订后的产品质量标准、说明书和标签，自发布之日起执行。此前发布的上述产品兽药质量标准、说明书和标签同时废止。

特此公告。

附件：1.进口兽药注册目录

2. 质量标准

3.说明书和标签

农业农村部

2019年9月11日

附件1

进口兽药注册目录

附件2

猪伪狂犬病活疫苗( Bartha株)等3种兽药产品质量标准

一、猪伪狂犬病活疫苗( Bartha株)质量标准

猪伪狂犬病活疫苗( Bartha株)

Zhu Weikuangquanbing Huoyimiao (Bartha Zhu)

Pseudorabies Vaccine, Live (Strain Bartha)

本品系用猪伪狂犬病病毒Bartha株接种羔羊心脏细胞系(IC01)单层培养，收获培养物，加适宣稳定剂，经冷冻真空干燥制成。用于预防猪伪狂犬病

【性状】浅褐色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。

【无菌检验】按现行《中国兽药典》附录或《欧洲药典)进行检验，应无菌生长。

【支原体检验】按现行《中国曾药典)附录或《欧洲药典》进行检验，应无支原体生长。

【外源病毒检验】按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无外源病毒污染。

【鉴别检验】下列方法任择其一。

中和法 取IC01细胞单层，用胰溶液消化，用含5％胎牛血清的MEM培养基制备成细胞混悬液，使每毫升悬液中含有8×10⁴个细胞。用MEM培养基将疫苗作4倍系列稀释，接种96孔细胞培养板，每个稀释度6孔，每孔0.05ml，每孔加入等量猪伪狂大病病毒特异性抗血清或单克隆抗体，每个稀释度另接种6孔，每孔0.05ml。振摇，置37℃1小时后，在每孔中加入细胞悬液0.15ml，置37℃培养7日，观察CPE。分别计算两组的 CCID₅₀。未中和组CCID₅₀应不低于中和组CCID₅₀的100倍。

荧光抗体染色法 取2个4孔细胞培养板(每孔大小约2cm²)，每孔各加入0.8ml猪睾丸细胞(ST细胞)悬液(2.65×10⁵个细胞/ml)和0.2ml待检疫苗。同时做8孔阴性细胞对照和8孔阳性病毒对照(阳性对照取不同稀释度的猪伪狂犬病毒液进行)。在37℃下培养24小时，用丙溶液固定细胞。用猪伪狂犬病病毒gⅡ、gⅢ、gp50单克隆抗体混合物分别与4个待检疫苗孔、阴性细胞对照孔和阳性病毒对照孔中的细胞作用，用猪伪狂大病病毒gⅠ单克隆抗体与另4个待检疫苗孔中的细胞作用。然后用羊抗鼠荧光抗体染色，在荧光显微镜下观察特异性荧光。阴性细胞对照孔均应不出现荧光，阳性病毒对照孔均应出现荧光。用猪伪狂大病病毒gⅡ、gⅢ、gp50单克隆抗体混合物作用的待检疫苗孔中应出现荧光，用猪伪狂大病毒gI单克隆抗体作用的待检疫苗孔中应不出现荧光。

【安全检验】用3～4周龄猪2头，各耳后颈部肌肉注射疫苗10头份(2ml)，观察14日，并在接种后4日内以及第7～11日每日测定体温，应不出现体温升高和其他全身或局部不良反应。

【病含量测定】取IC01细胞单层，用胰酶溶液消化，用含5％胎牛血清的MEM培养基制备成细胞悬液，使每毫升悬液中含8x10⁴个细胞，按瓶签注明的头份，用含有水解乳蛋白的MEM培养基将疫苗稀释至1头份0.1ml，再作4倍系列稀释，取适当稀释度，每个稀释度接种96孔细胞培养板，每个稀释度6孔，每孔0.1ml，每孔加入细胞悬液0.15ml，置37℃培养7日，观察CPE，计算病毒含量。每头份疫苗中的病毒含量应不低于10^6.3CCID₅₀。

【剩余水分测定】按现行《中国兽药典》附录进行测定，应不超过3.5％。

【真空度测定】按现行《中国鲁药典》附录进行测定，应符合规定。

【作用与用途】用于预防猪伪狂犬病。

【用法与用量】耳后颈部深层肌肉注射，每头猪1头份(2ml)。

后备种猪(小母猪)  在第一次配种前接种疫苗2次，2次间隔3～4周，分娩前2～3周加强接种1次。

种猪(母猪)  接种疫苗2次，2次间隔3～4周，无需考虑生理状况，每次分娩前2～3周，加强接种1次。

育肥猪 在育肥期开始时(至少10周龄)接种1次。如为污染猪场，建议3～4周后加强接种1次。

【注意事项】

(1)仅用于接种健康猪

(2)应用专门的稀释液稀释疫苗。

(3)疫苗稀释后应立即使用。

(4)应采用常规无菌操作方法进行接种，

(5)应使用非经灭菌剂和消毒剂进行灭菌处理的无菌器具

(6)用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

(7)一旦注入人体，应立即就医。

【规格】(1)10头份/瓶 (2)25头份/瓶 (3)50头份/瓶 (4)100头份/瓶

【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为24个月

【生产企业】梅里亚有限公司法国生产厂( Merial SAS， France)

附注:稀释液质量标准

【性状】外观乳白色均一液体

装量  按现行《(中国兽药典》附录进行检验，应不低于标示量

黏度  按现行《中国兽药典》附录或《欧洲药典》进行检验，应为2～16mPa.S.。

【无菌检验】按现行《中国兽药典》附录或《欧洲药典》进行检验，应无菌生长。

【安全检验】用体重20～30kg猪2头，各颈部肌肉或皮下注射待检样品4ml，观察17日，每日测定体温，观察期末扑杀并剖检。应不出现体温升高和其他全身或局部不良反应。

【病毒相容性检验】分别用蒸馏水和稀释液稀释疫苗，测定两组疫苗病毒含量，其差异应不超过10^0.7CCID₅₀ 。

【汞类防隔剂残留量测定】按现行《中国鲁药典》附录进行检验，应不超过0.01％。

【pH值测定】按现行《中国兽药典》附录进行测定，应为7.5～80

【规格】(1)20ml/瓶  (2)50ml/瓶  (3)100ml/瓶  (4)200ml/瓶

【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为24个月。

二  、鸡传染性鼻炎灭活疫苗(A型+C型)质量标准

鸡传染性鼻炎灭活疫苗(A型+C型)

Ji Chuanranxingbiyan Miehuoyimiao(A Xing+C Xing)

Coryza Vaccine, Inactivated (Serotype A+Serotype C)

本品系用副鸡嗜血杆菌A型(Japan221株)和C型( Modesto株)分别接种于适宜培养基培养，收获培养物，浓缩后，经硫柳汞灭活，加氢氧化铝胶制成。用于预防鸡传染性鼻炎。

【性状】本品静置后，上层为澄明液体，下层为沉淀物，振摇后呈白色均匀混悬液。

【无菌检验】按现行《中国兽药典》附录或《欧洲药典》进行检验，应无菌生长。

【装量检查】按现行《中国兽药典》附录进行检查，应符合规定。

【安全检验】用2～4周龄SPF鸡10只，各肌肉接种疫苗0.6ml，观察21日。应无异常反应。

【效力检验】用2～3月龄SPF鸡20只，每只皮下注射疫苗03ml，免疫后21日，用免疫鸡10只连同对照鸡10只，每只眶下窦内注射221株(A型)的鸡肉汤培养物稀释液0.2ml，另用免疫鸡10只连同对照鸡10只，每只下案内注射Hpg-668株(C型)的鸡肉汤培养物稀释液0.2ml。观察7日，对照组均应至少8只发病，免疫组均应至少保护8只。

【铝离子含量测定】按附注方法进行测定，应为1.9～2.3 mg/ml

【硫柳汞残留量测定】按现行《中国兽药典》附录进行测定，应符合规定。

【p值测定】技现行《中国兽药典》附录进行测定，应为7.0±0.5

【作用与用途】用于预防鸡传染性鼻炎

【用法与用量】皮下或肌肉注射。每只0.3ml

【注章事项】

(1)疫苗用前应摇匀。

(2)仅用于接种健康鸡。

(3)接种时，应执行常规无菌操作。

(4)用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

(5)如误将疫苗注入人体，特别是高压注射在手指及手腕部位时，可能会产生剧烈的局部炎症反应，应立即采取下列措施:A.用消毒剂消毒或用肥皂水清洗注射部位，B.冰敷该部位，C.紧急就医(同时向医生出示标签、说明书或疫苗等)。对医生的提示:该疫苗为灭活产品，且不会导致任何人畜共患病，对就诊者应采取下列措施:A仔细清洁创面，B检查破伤风免疫是否在有效保护期内。C如果是高压注射在手指或手腕部位，在采取进一步医疗措施前，应征询手部外科医生的意见。D如必要，应采取相应治疗措施，如给予止痛、消炎及抗组胺药等。E每日进行临床观察。

(6)用于肉鸡时，屠宰前21日内禁用。

(7)在接种部位可见短时间的轻微肿胀。

【规格】(1)150ml/瓶  (2)300ml/瓶

【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为24个月。

【生产企业】梅里亚有限公司法国生产厂( Merial SAS. France)

地址:29， Avenue Tony Garnier69007 Lyon， France

附注:铝离子含量测定方法

1材料

1.1  硫酸(17.8mol/L)

1.2  硝酸(15.8mol/L)

1.3  氢氧化钠浓溶液(14.4mol/L) 称取400g氢氧化钠，慢慢加到800ml纯化水中，边加边连续搅拌。用纯化水定容至1000ml。在塑料容器中室温保存。

1.4  0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液  称取8g乙二胺四乙酸二钠，加热溶解于800m1纯化水中，冷却，定容至1000ml，摇匀。

1.5  0.2mol/L醋酸盐缓冲液(pH值4.4)  取0.2mol/L醋酸(0.601ml/50ml)30.5ml、0.2mol/L醋酸钠(1.361g/50ml)19.5ml，混合摇匀。

1.6  0.1％甲基橙溶液  称0.1g甲基橙，溶于70℃的纯化水中，冷却，定容至100ml。

1.7  0.02mol/L硫酸铜溶液  将5克硫酸铜(CuSO_4.。2H₂O)溶解于纯化水中，加4～5滴硫酸，定容至1000ml，摇匀。

1.8  0.1％1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN)溶液  称取0.1gPAN，溶于100ml乙醇中。

2方法

2.1  矿化  取一烧瓶，加入待滴定的含铝溶液(铝含量少于6mg)，加入1.0ml硫酸、0.1ml硝酸溶液和一些玻璃珠。矿化至浓白烟生成。如发生炭化，加数滴硝酸溶液，并加热至颜色褪尽。冷却。

2.2  中和  小心加入10ml纯化水，煮至溶液澄清。冷却。加入0.05ml甲基橙溶液。以浓氢氧化钠溶液中和(用滴定管)。如形成沉淀物，逐滴加入稀硫酸溶液，使之溶解。

2.3  滴定  将溶液转移至一250ml锥形瓶中，并用25ml纯化水清洗烧瓶。精确加入25ml0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液，再加入10ml醋酸盐缓冲液(pH值4.4)，煮沸3分钟。然后加入0.1mlPAN溶液。用0.02mol/L硫酸铜溶液对上述热溶液进行滴定，直至颜色变为暗紫色。

2.4  对照  用纯化水替代含铝溶液，进行相同操作。滴加的0.02mol/L硫酸铜溶液的量须接近25ml:否则，应核对0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液与0.02mol/L硫酸铜溶液的比例。

2.5  假设试验组中加入x ml的0.02mol/L硫酸铜溶液，而对照组中加入t ml的0.02mol/L硫酸铜溶液，则与铝离子螯合的0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液为(t-x)ml，1ml0.02mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液相当于0.5396mg铝，故待检溶液中的铝含量为0.5396(t-x)mg。

三、猪萎缩性鼻炎灭活疫苗(支气管败血波氏杆菌833CER株+D型多杀性巴氏杆菌毒素)质量标准

猪萎缩性鼻炎灭活疫苗(支气管败血波氏杆菌833CER株+D型多杀性巴氏杆菌毒素)

Zhu Weisuoxingbiyan Miehuoyimiao(Zhiqiguanbaixueboshiganjun833CER Zhu+Dxing

Duoshaxingbashiganjundusu

Inactivated vaccine to prevent progressive and non-progressive atrophic rhinitis in pigs

本品系用支气管败血波氏杆菌833CER株和基因修饰的大肠杆菌分别接种适宜培养基，收获支气管败血波氏杆菌，经甲醛溶液灭活后浓缩，与收获的重组D型多杀性巴氏杆菌毒素混合，加氢氧化铝胶、二乙氨乙基葡聚糖和人参佐剂混合制成。用于接种母猪和后备母猪，预防所产仔猪由支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌引起的进行性和非进行性猪萎缩性鼻炎。

【性状】 静置后，上层为灰白色至淡黄色液体，下层为白色至淡黄色沉淀，振荡后星均匀混悬液。

【装量检查】 按现行《中国曾药典》附录进行检验，应符合规定。

【无菌检验】 按现行《中国兽药典》附录进行检验，应无菌生长。

【安全检验】 用8-10周龄健康猪或妊娠母猪(支气管败血波氏杆菌凝集抗体效价应不高于1:32，见附注1:多杀性巴氏杆菌毒素抗体应为阴性，见附注2)2头，各颈部肌肉注射疫苗4ml(2头份)，观察14日，并记录接种前24小时、接种后第2、4、6、24和48小时的直肠温度。观察期内应不出现因疫苗引起的明显的局部和全身不良反应，若出现体温升高应不超过2℃且应在24小时内恢复正常。

【抗原鉴定】  用体重18～-22g健康小鼠10只，各皮下注射经空白疫菌5倍稀释的被检疫苗0.2ml，接种后14日，连同对照小鼠2只，采血，分离血清，按下列方法分别对支气管败血波氏杆菌抗原和多杀性巴氏杆菌毒素抗原进行鉴别检验：

(1)支气管败血波氏杆菌部分  将免疫组每只小鼠血清等量混合获得免疫组小鼠混合血清，将对照组每只小鼠血清等量混合获得对照组小鼠混合血清，用微量平板凝集试验(MAT)(见附注1)测定支气管败血波氏杆菌抗体效价，免疫组小鼠混合血清的抗体效价(MAT滴度)应高于1:8，对照组小鼠混合血清的抗体效价(MAT滴度)应不高于1:8

(2)多杀性巴氏杆菌海素部分  按效力检验项的描述进行检验，免疫组应至少有1只小鼠出现血清阳转，对照组小鼠应全部血清阴性

【效力检验】  (1)支气管败血波氏杆菌部分  用流式细胞仪(见附注3)测定疫苗中灭活的支气管败血波氏杆菌含量，应为9.62～9.98BbCC/头份

(2)多杀性巴氏杆菌毒素部分  用体重18～22g健康小鼠10只，各皮下注射经空白疫苗5倍稀释的被检疫苗0.2ml，接种后14日，连同对照小鼠2只，采血、分离血清，用 ELISA方法(见附注2)测定抗多杀性巴氏杆菌毒素的血清学反应。免疫组应至少有7只小鼠出现血清阳转:对照组的小鼠应全部血清阴性。

【甲醛残留量测定】 按现行《中国兽药典)附录进行检验，应符合规定。

【PH值测定】 按现行《中国兽药典)》附录进行检验，应为6.4～7.0。

【作用与用途】  用于接种母猪和后备母猪，预防所产仔猪由支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌引起的进行性和非进行性猪萎缩性鼻炎。

【用法与用量】  用于母猪和后备母猪，颈部肌肉注射，每头每次接种1头份(2ml)。推荐采用下列接种程序：

基础免疫  未曾接种过该疫苗的母猪和后备母猪需进行2次接种，在预产期前6～8周首免，间隔3～4周再接种1次。

加强免疫  以后每次分娩前3一4周再接种1次。

【注意事项】

(1)仅用于接种健康猪

(2)严禁冻结，避光保存

(3)用前应充分摇匀，并恢复至室温(15～25℃)

(4)用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

(5)接种时，应按常规的无菌操作方法进行。

(6)疫苗接种后，注射位点可能会出现一过性轻度肿胀:直肠温度升高偶尔达到1.5℃，不需处理，24小时内可恢复正常。

【规格】(1)20ml/瓶  (2)50ml/瓶  (3)100ml/瓶  (4)250ml/瓶

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为24个月

【生产企业】 西班牙海博莱生物大药厂( LABORATORIOS HIPRA，S.A.)

附注:

1微量平板凝集试验(MAT)测定支气管败血波氏杆菌抗体

1.1材料

1.1.1  U形或V形96孔微量反应板

1.1.2  阳性对照血清

1.1.3  阴性对照血清

1.1.4  内控血清

1.1.5  8道移液器(50～300μl)

1.1.6  单道移液器(20～200μl)

1.1.7  自动分装加样器

1.1.8  灭菌瓶

1.1.9  56℃恒温水浴锅

1.1.10  37℃恒温培养箱(含或不含5％CO₂均可)

1.1.11  湿盒

1.1.12  2～8℃冷柜

1.1.13   封板膜

1.1.14   浓缩的支气管败血波氏杆菌抗原(海博莱提供)

1.1.15  PBS(PH值7.1～7.5)

1.2    方法

1.2.1血清样品置56℃水浴中灭活30分钟。

板1的操作图示

1.2.2  板1和板2每孔各加入PBS溶液50μl。

1.2.3  按图示向板1和板2的第一列孔中加入50μl被检血清或对照血清(阳性对照、阴性对照和中控血清)，每种样品各加2个孔。

1.2.4  用移液器吹吸混匀后从第1列各孔吸取50μl混合液加入第2列孔，即1/4稀释度处。

1.2.5  用移液器吹吸混匀后从第2列各孔吸取50μl混合液加入第3列孔，即1/8稀释度处。经吹吸混匀后再从第3列各孔吸取50μl混合液加入第4列孔，即1/16稀释度处。

1.2.6  重复以上操作至第12列。

1.2.7  对第12列各孔液体吹吸混匀后弃去50ul至盛有消毒液的容器中，使得第12列各孔液体最终体积为50μl，最终稀释度为1:4096％。

1.2.8  用PBS溶液稀释浓缩抗原至所要求的稀释度。

1.2.9  每孔加入稀释后的抗原液50μl。注:加入的抗原是与血清进行抗原-抗体反应，不视为血清稀释。

1.2.10  轻轻振荡混匀并用封板膜密封板孔，置湿盒中在37℃下孵育2小时，然后在2～8℃下再孵育24小时。

1.3  结果有效性判断  阳性对照血清的抗体效价应不低于1:512;阴性对照血清的抗体效价应不高于1:8;内控血清的抗体效价应不低于1:32;抗原对照所有孔底应呈清晰的沉淀。

14  结果判定

1.4.1  将微量板恢复至室温。

1.4.2从板孔底部对光观察微量板。

 

1.4.3  被检血清的抗体滴度为发生完全凝集的血清最高稀释倍数。因每份血清进行两个平行样试验，其最终结果取两个数值的几何平均数。

2   ELISA方法检测抗多杀性巴氏杆菌毒素抗体

2.1  材料

2.1.1   ELISA PMT试剂盒

2.1.2  37℃培养箱

2.1.3  带450nm滤光器的 ELISA读数仪

2.1.4  微量板振荡仪

2.1.5  内控血清

2.1.6  多道加样器

2.2   方法

2.2.1  根据试剂盒的使用说明，吸取推荐体积的“额外还原缓冲液”加入试剂盒内标注“额外PMT＂的一个瓶子中。轻轻混匀，室温(20～25℃)下放置30分钟，直至冻干的样品完全溶解。

2.2.2  根据被检血清的样品数量计算所需使用的行数。

2.2.3  将不透明的白色孔的板条并排放在型料支架上。

2.2.4  用多道加样器向每孔中加入蒸馏水30μl

2.2.5  阳性对照:向A1和A2孔中加入经蒸馏水1:2稀释的阳性对照血清30μl(图1)

2.2.6  阴性对照:向B1和B2孔中加入经蒸馏水1:2稀释的阴性对照血清30μl(图1)

2.2.7  内控血清:向C1和C2孔中加入经蒸馏水1:2稀释的内控血清30u(图1)

2.2.8  对照缓冲液:向H1和H2孔中加入蒸馏水30μl(图1)

注:如果需用多于1列的板条(最大为6)，阳性对照、阴性对照、内控血清和缓冲液也仅使用1次

2.2.9  用蒸馏水对每种被检血清进行1:2稀释(如将50μl血清加入50μl蒸馏水中，混匀)。按图1在相应的孔中加入稀释后的被检血清30μl，每种被检血清加2孔。

图1.加样图示

2.2.10  每孔加入“额外PMT＂(2.2.1中配制的溶液)40μl。

2.2.11  用 PMT ELISA试剂盒中的封板膜密封所有的加样孔。

2.2.12  37℃下作用30分钟。

2.2.13  将透明孔的板条放在支架上(保存在试剂盒铝包中)。透明板条的使用数量与白色板条的数量相同。

2.2.14  向每个透明板条的孔中加入结合物50μl

2.2.15  从每个白色板条的孔中吸取50μl加入到透明板条的相应孔中。每次加样后都要更换吸头。下面每个步骤中都要使用封板膜密封。

2.2.16  用封板膜密封反应孔，置400r/min的微量板振荡仪，室温(20～25℃)下作用45分钟。

2.2.17  用1倍洗涤缓冲液(按试剂盒要求将25倍浓缩洗涤液稀释25倍后使用)清洗每个孔，每孔250μl，洗3次，清洗时确保每孔都灌满洗涤缓冲液，然后排空。

2.2.18  每孔中加入TMB底物溶液100μl

2.2.19  将反应孔置室温(20～25℃)下避光作用15分钟。

2.2.20  每孔中加入终止液100μl，终止反应。

2.2.21  用酶标仪读取450nm波长下的OD值(必须在加入终止液后的1个小时内完成读数)。

2.3  结果计算和有效性判断

2.3.1  计算

阳性对照: 计算对应孔(图1中的A1和A2孔)的平均吸光度(OD阳性对照)。

阴性对照: 计算对应孔(图1中的B1和B2孔)的平均吸光度( OD阴性对照)。

内控血清: 计算对应孔(图1中的C1和C2孔)的平均吸光度(OD内控)。

缓冲液对照:计算对应孔(图1中的H1和H2孔)的平均吸光度(OD缓冲液对照)

被检血清:计算对应孔(图1中的D1-D2、E1-E2等孔)的平均吸光度(OD被检血清)

2.32  结果有效性判断: 符合以下条件，试验判为有效:

OD缓冲液对照值应高于0.600。

OD阳性对照值应低于25％OD缓冲液对照。

OD阴性对照值应高于65％OD缓冲液对照。

内控血清的试验结果应为阳性。

如果不符合上述条件，则结果不可信，需重检。

2.4  结果判定  将缓冲液对照的OD值乘以0.5，获得血清检测结果阴阳性判定临界值:

OD临界值=OD缓冲液对照*0.5=50%OD缓冲液对照

阳性结果:被检血清OD值低于OD临界值

阴性结果，被检血清OD值高于OD临界值

3  流式细胞似定量检测支气管血波氏杆表度

3.1  材料

3.1.1  500μmol/L绿色荧光染料(SYTO13)储备液

3.1.2  灭菌PBS(PH值7.1-7.5，用0.22μm滤膜过滤)

3.1.3  15 ml Eppendorf微量管

3.1.4  U型96孔微量板

3.1.5  单道和多道精密移液器

3.1.6  无菌吸头

3.1.7  一次性无菌玻璃瓶

3.1.8. 柠檬酸钠二水合物

3.1.9  特检疫苗样品

3.1.10  流式细胞仪( MILLIPORE ,GUAVA系列)

3.2  样品制备

3.2.1  支气管败血波氏杆菌佐剂的洗脱:在检测的前一天采用以下步骤对每份待检疫苗样品的佐剂进行洗脱:称量0.57g柠橡酸钠二水合物置一次性无菌玻璃瓶中，向瓶中加入特检疫苗5ml。4℃下水平振荡(180r/min)过夜。

3.2.2  疫苗洗脱后的预稀释：用0.22μm滤膜过滤后的PBS对每份洗脱后的待检疫苗进行1:10稀释，然后在一次性无菌玻璃瓶中进行10倍系列稀释获得1:10,000的稀样液。

3.2.3  制备含5μmol/L SYTO13的特检样品溶液:吸取500μmol/L SYTO13储备液5μl与待检疫苗样品495μl置0.5ml微量管中，盖帽，用涡旋器以最大速(2500 r/min)混匀10秒，用锡纸包裹微量管避光。

3.2.4  制备含5μmol/L SYTO13的PBS溶液:用0.22μm滤膜过滤后的PBS对500μmol/LSYTO13储备液进行100倍稀释即得，作为样品稀释剂，用锡纸包观光，待用。

3.2.5  向微量板的A2和A3孔(图1)中加入含5 μmol/L. SYTO13的PBS溶液，每孔150μl。

3.2.6  向微量板的A1孔中加入含5μmol/L SYTO13的特检样品溶液300μl。

3.2.7  从A1孔中吸取150μl加入A2孔，混匀后再从A2孔吸取150μl加入A3孔，按此方法对样品进行2倍系列稀释，每次稀释均需更换吸头，从A3孔中吸取混合物150μl，弃去，保证每个孔中液体的工作体积为150μl。

3.2.8  设置2个染料阴性对照孔:向B1和B2孔中加入含5μmol/L SYTO13的PBS溶液，每孔150μl，用锡纸包惠微量板，室温下放置，准备读数(在染色后的5至60分钟内必须完成读数)

图1.微量板加样示意图

 

3.3  流式细胞仪采样和读数

3.3.1   按照仪器使用指南对流式细胞仪进行清洗和验证，确保仪器的正常运作。用分析样品对仪器进行日常的验证工作，只有在验证结果有效的情况下方可进行检测分析。

3.3.2  使用 Workedit程序生成一个 Worklist，选择待检测的样品孔，设置采样条件：每个孔计数2次，采样数目2000。

3.3.3  鼠标双击桌面上的图标打开 Guavasoft程序。

3.3.4  从Guavasoft程序的主菜单中选择“ ExpressPlus＂。

3.3.5  采样  从  ExpressPlus菜单中选择 Start Worklist，载样盘从仪器中弹出，显示屏出现一个提示进样的信息。(注:载样盘前的工作区域应当保持清洁)。

3.3.6  将微量板(A1孔对向右上角)放到载样盘上。按照显示屏对话框的提示放置一个用于清洗的1.5ml微量管。放置好样品和用于清洗的试管后，点击对话框中的OK。

3.3.7  选择并打开先前生成的 Worklist(*.gwl)文件。选择用于保存试验结果的文件夹，对其命名(*EP5.FCS)。也可以选择一个已存在的文件，对其重命名或将现有的结果添加到其中。选择设置工作条件( Retrieve Settings)。

3.3.8  点击 Next Step转换到分析屏幕。

3.3.9  选择 Resume。系统对第一份挑选的样品开始采集并自动显示结果。被采样的孔被标志为红色。

3.4  分析和计算

3.4.1  使用分析屏幕来分析样品、打印结果、标注评论或检查采样过程中产生的记录。

3.4.2  样品的浓度显示在标题为 Cells/ml I的下面。

3.4.3  用 Sample Information面板上出现的读数( cells/ml)计算2ml液体中的细胞数(cells/2ml)，再计算每个稀释度2次读数的平均值。如果待检的样品被稀释，终浓度的计算应当乘上对应的稀释倍数。计算3个稀释度的平均值。将所得结果进行以10为底的对数转换，用BbCC/2ml(每2ml中支气管败血波氏杆菌细胞计数)来表示每头份待检疫苗中支气管败血波氏杆菌的浓度。

猪伪狂犬病活疫苗（Bartha株）等3种兽药产品

说明书和标签

一、猪伪狂犬病活疫苗（Bartha株）说明书和内包装标签

（一）猪伪狂犬病活疫苗（Bartha株）说明书

兽用

【兽药名称】

通用名 猪伪狂犬病活疫苗（Bartha株）

商品名 猪克伪®

英文名 Pseudorabies Vaccine，Live（StrainBartha）

汉语拼音 Zhu Weikuangquanbing Huoyimiao（Bartha Zhu）

【主要成分与含量】 每头份疫苗中含猪伪狂犬病病毒Bartha株至少106.3CCID50。

【性状】 浅褐色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。

【作用与用途】 用于预防猪伪狂犬病。

【用法与用量】 耳后颈部深层肌肉注射，每头猪1头份（2mL）。

后备种猪（小母猪） 在第一次配种前接种疫苗2次，2次间隔3～4周，分娩前2～3周，加强接种1次。

种猪（母猪） 接种疫苗2次，2次间隔3～4周，无须考虑生理状况，每次分娩前2～3周，加强接种1次。

育肥猪 在育肥期开始时（至少10周龄）接种1次。如为污染猪场，建议3～4周后加强接种1次。

【不良反应】 一般无可见的不良反应。

【注意事项】 （1）仅用于接种健康猪。

（2）应用专门的稀释液稀释疫苗。

（3）疫苗稀释后应立即使用。

（4）应采用常规无菌操作方法进行接种。

（5）应使用非经灭菌剂和消毒剂进行灭菌处理的无菌器具。

（6）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

（7）一旦注入人体，应立即就医。

【规 格】 （1）10头份/瓶 （2）25头份/瓶（3）50头份/瓶 （4）100头份/瓶

【包装】 （1）1瓶10头份疫苗+1瓶20mL稀释液 （2）10瓶10头份疫苗+10瓶20mL稀释液 （3）1瓶25头份疫苗+1瓶50mL稀释液 （4）10瓶25头份疫苗+10瓶50mL稀释液（5）1瓶50头份疫苗+1瓶100mL 稀释液 （6）10瓶50头份疫苗+10瓶100mL稀释液 （7）1瓶100头份疫苗+1瓶200mL稀释液 （8）10瓶100头份疫苗+10瓶200mL稀释液

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为24个月。

【《进口兽药注册证书》证号】

【生产企业】 梅里亚有限公司法国生产厂（Merial SAS, France）

地址：29, Avenue Tony Garnier, 69007 Lyon,France

仅在兽医指导下使用

（二）猪伪狂犬病活疫苗（Bartha株）内包装标签

兽用

猪克伪®

猪伪狂犬病活疫苗（Bartha株）

10（25、50、100）头份/瓶            

《进口兽药注册证书》证号：

批号：

有效期至：

【作用与用途】 用于预防猪伪狂犬病。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为24个月。

【生产企业】 梅里亚有限公司法国生产厂（Merial SAS, France）

仅在兽医指导下使用

二、鸡传染性鼻炎灭活疫苗（A型+C型）说明书和内包装标签

（一）鸡传染性鼻炎灭活疫苗（A型+C型）说明书

兽用

【兽药名称】

通用名 鸡传染性鼻炎灭活疫苗（A型+C型）

商品名 无

英文名 Coryza Vaccine,Inactivated（SerotypeA+Serotype C）

汉语拼音 Ji Chuanranxingbiyan Miehuoyimiao（A Xing+C Xing）

【主要成分与含量】 含灭活的副鸡嗜血杆菌A型（Japan221株）和C型（Modesto株）。

【性状】 本品静置后，上层为澄明液体，下层为沉淀物，振摇后呈白色均匀混悬液。

【作用与用途】 用于预防鸡传染性鼻炎。

【用 法 与用 量】皮下或肌肉注射。每只0.3mL 。

【不良反应】 在接种部位可见短时间的轻微肿胀。

【注意事项】 （1）疫苗用前应摇匀。

（2）仅用于接种健康鸡。

（3）接种时，应执行常规无菌操作。

（4）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

（5）如误将疫苗注入人体，特别是高压注射在手指及手腕部位时，可能会产生剧烈的局部炎症反应，应立即采取下列措施：A.用消毒剂消毒或用肥皂水清洗注射部位，B.冰敷该部位，C.紧急就医（同时向医生出示标签、说明书或疫苗等）。对医生的提示：

该疫苗为灭活产品，且不会导致任何人畜共患病，对就诊者应采取下列措施：A.仔细清洁创面;B.检查破伤风免疫是否在有效保护期内;C.如果是高压注射在手指或手腕部位，在采取进一步医疗措施前，应征询手部外科医生的意见;D.如必要，应采取相应治疗措施，如给予止痛、消炎及抗组胺药等。E.每日进行临床观察。

（6）用于肉鸡时，屠宰前21日内禁用。

【规格】 （1）150mL/瓶 （2）300mL/瓶

【包装】 10瓶/盒

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为24个月。

【《进口兽药注册证书》证号】

【生产企业】 梅里亚有限公司法国生产厂（Merial SAS,France）

地址：29，Avenue Tony Garnier 69007 Lyon，France

仅在兽医指导下使用

（二）鸡传染性鼻炎灭活疫苗（A型+C型）内包装标签

兽用

鸡传染性鼻炎灭活疫苗（A型+C型）

150（300）mL/瓶                  

《进口兽药注册证书》证号：

有效期至：

生产批号：

【作用与用途】 用于预防鸡传染性鼻炎。

【用法与用量】皮下或肌肉注射。每只0.3mL。

【注意事项】见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为24个月。

【生产企业】 梅里亚有限公司法国生产厂（Merial SAS,France）

仅在兽医指导下使用

三、猪萎缩性鼻炎灭活疫苗（支气管败血波氏杆菌833CER株+D型多杀性巴氏杆菌毒素）说明书和内包装标签

（一）猪萎缩性鼻炎灭活疫苗（支气管败血波氏杆菌833CER株+D型多杀性巴氏杆菌毒素）说明书

兽用

【兽药名称】

通用名 猪萎缩性鼻炎灭活疫苗（支气管败血波氏杆菌833CER株+D型多杀性巴氏杆菌毒素）

商品名 瑞立胜

英 文 名 I n a ct ivate d va cci ne to pr eventprogressive and non-progressive atrophic rhinitis in pigs

汉语拼音 Zhu Weisuoxingbiyan Miehuoyimiao(Zhiqiguanbaixueboshiganjun 833CER Zhu+D xing Duoshaxingbashiganjundusu)

【主 要成分和 含 量】 每 头 份（2mL）含灭活的支气管败 血波氏杆菌833CER株9.62～9.98BbCC，含重组D型多杀性巴氏杆菌毒素至少1个鼠有效剂量（1MED70）。

BbCC：支气管败血波氏杆菌计数（Log10对数转化值）

1M ED 7 0：对小鼠 皮下接 种5 倍 稀 释 的 疫 苗0.2mL，可以使至少70%的小鼠出现血清阳转。

【性状】 静置后，上层为灰白色至淡黄色液体，下层为白色至淡黄色沉淀，振荡后呈均匀混悬液。

【作用与用途】 用于接种母猪和后备母猪，预防所产仔猪由支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌引起的进行性和非进行性猪萎缩性鼻炎。

【用法与用量】 用于母猪和后备母猪，颈部肌肉注射，每头每次接种1头份（2mL）。推荐采用下列接种程序：

基础免疫 未曾接种过该疫苗的母猪和后备母猪需进行2次接种，在预产期前6～8周首免，间隔3～4周再接种1次。

加强免疫 以后每次分娩前3～4周再接种1次。

【不良反应】 疫苗接种后，注射位点可能会出现一过性轻 度 肿胀；直 肠温 度升高偶尔达 到1.5℃，不需处理，24h内可恢复正常。

【注意事项】 （1）仅用于接种健康猪。

（2）严禁冻结，避光保存。

（3）用 前 应 充 分 摇 匀 ，并 恢 复 至 室 温（15～25℃）。

（4）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。

（5）接种时，应 按常 规的无菌 操 作 方 法 进行。

【规格】 （1）10头份（20mL）/瓶 （2）25头份（50mL）/瓶 （3）50头份（100mL）/瓶 （4）125头份（250mL）/瓶

【包装】 玻璃瓶：（1）1瓶/盒 （2）10瓶/盒   塑料瓶：（1）1瓶/盒 （2）10瓶/盒

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为24个月。

【《进口兽药注册证书》证号】

【生 产 企 业】 西 班 牙 海博 莱 生物 大 药厂（LABORATORIOS HIPRA, S.A.）

地址 Avda. La Selva, 135. 17170 －Amer(Girona) Spain

仅在兽医指导下使用

（二）猪萎缩性鼻炎灭活疫苗（支气管败血波氏杆菌833CER株+D型多杀性巴氏杆菌毒素）内包装标签

兽用

瑞立胜

猪萎缩性鼻炎灭活疫苗（支气管败血波氏杆菌833CER株+D型多杀性巴氏杆菌毒素）

10（25、50、125）头份/瓶

《进口兽药注册证书》证号：

批 号：

有效期至：

【作用与用途】 用于接种母猪和后备母猪，预防所产仔猪由支气管败血波氏杆菌和多杀性巴氏杆菌引起的进行性和非进行性猪萎缩性鼻炎。

【用法与用量】 颈部肌肉注射，每头每次接种1头份（2mL）。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为24个月。

【生 产 企 业】 西 班 牙 海博 莱 生物 大 药厂（LABORATORIOS HIPRA, S.A.）

仅在兽医指导下使用